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O meio de Iscove (IMDM) é uma modificação do Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM), introduzida em 1976 por Guilbert & Iscove. O meio é suplementado com selênio, vitaminas, aminoácidos, piruvato de sódio e tampão HEPES. O nitrato de ferro, da formula original foi substituído por Nitrato de potássio. Posteriormente, outros suplementos contendo albumina, lecitina e transferrina foram acrescidos, assim este meio é apropriado para o crescimento de células precursoras de macrófagos e eritrócitos sem a necessidade de acrescentar soro de outra origem ao meio.
O meio de Iscove tem demonstrado ser um excelente suporte para o crescimento de linfócitos B murinos, tecidos hematopoieticos de medula, células B estimuladas com lipopolissacarídeos, linfócitos T e uma variedade de células híbridas.
Aplicações:
- O IMDM é frequentemente utilizada para o crescimento serum-free de células hematopoiéticas. Isto inclui linhagens celulares de fusão como oshibridomas.
- Recommendado como formulação base para o desenvolvimento de qualquer outro meio serum-free.
- A adição do tampão HEPES incrementa a capacidade do meio e aumenta a abrangência do tamponamento ao máximo.
- Recomendado para células que crescem melhor em pHs acima de 7,2.
Referências:
- Iscove, N.N and Melchers, F. (1978). Complete Replacement of Serum by Albumin, Transferrin, and Soybean Lipid in Cultures of Lipopolysaccharide-Reactive B Lymphocytes. J. Exp. Medicine. 147, 923-933.
- Iscove, N.N., Guilbert, L.J. and Weyman, C. (1980). Complete Replacement of Serum in Primary Cultures of Erythropoietin
- Dependent Red Cell Precursers [CFU-E] by Albumin, Transferrin, Iron, Unsaturated Fatty Acid, Lecithin and Cholesterol. Exp. Cell Research. 126, 121-126.
Composição do meio de Iscove
Sais inorgânicos | mg/L |
CaCl2 (anidro) | 165 |
KCl | 330 |
KNO3 | 0,076 |
MgSO4 (anidro) | 97,67 |
NaCl | 4.505 |
Na2SE3 (anidro) | 0,0114 |
NaH2PO4·H2O | 125 |
Aminoácidos | mg/mL |
L-Alanina | 25 |
L-Arginina HCl | 84 |
L-Asparagina H2O | 28,4 |
L- Ácido Aspártico | 30 |
L-Cistina 2HCl | 91,24 |
L-Ácido Glutâmico | 75 |
L-Glutamina | 584 |
Glicina | 30 |
L-Histidina HCI·H2O | 42 |
L-Isoleucina | 105 |
L-Leucina | 105 |
L-Lisina HCl | 146 |
L-Metionina | 30 |
L-Fenilalanina | 66 |
L-Prolina | 40 |
L-Serina | 42 |
L-Treonina | 95 |
L-Triptofano | 16 |
L-Tirosina 2Na·2H2O | 103,79 |
L-Valina | 94 |
Vitaminas | mg/mL |
d-Biotina | 0,013 |
D-Ca Pantotenato | 4 |
Cloreto de Colina | 4 |
Ácido Fólico | 4 |
Mio-Inositol | 7,2 |
Niacinamida | 4 |
Piridoxal HCl | 4 |
Riboflavina | 0,4 |
Tiamina HCl | 4 |
Vitamina B-12 | 0,013 |
Outros componentes | mg/mL |
D-Glicose | 4.500 |
HEPES | 5.958 |
Vermelho de fenol | 15,9 |
Piruvato de Sodio | 110 |
NaHCO3 | 3.024 |