Código: 13-BR850-25
Apresentação: 250 extrações

Instruções de Uso

1. Uso Pretendido

Os reagentes utilizam colunas de sílica (cartuchos/filtro) para extração e purificação de RNA. Recomendados para amostras de:

• Sangue total
• Plasma
• Soro
• Urina
• Culturas de células
• Amostras coletadas via swab nasofaríngeo

2. Características do Produto

• Sistema genérico baseado em colunas de sílica de alta capacidade.
• Compatível com diagnóstico in vitro (qPCR, RT-qPCR).
• Inclui Proteinase K para lise de proteínas e Carreador de RNA para otimização.

Composição do Produto (50 extrações):

Especificações:

• Alta eficiência com amostras respiratórias, sangue, e meios de transporte.
• RNA purificado adequado para aplicações moleculares.

Equipamentos Necessários (não fornecidos):

• Centrífuga (20.000 x g ou 14.000 rpm)
• Micropipetas (1-1000 µL) e ponteiras descartáveis com filtro
• Vórtex
• Bloco de aquecimento (56°C), banho-maria ou estufa
• Etanol absoluto (95-100%)
• Tubos tipo Falcon e microtubos

3. Preparo dos Reagentes

Proteinase K: Diluir com 500 µL do Diluente PA/PK. Armazenar a -20°C após reconstituição. Usar 10 µL por extração.
Carreador de RNA: Diluir com 250 µL do Diluente PA/PK. Usar 5 µL por extração.
Hemalise 1X: Diluir 1 parte de Hemalise-RBC 10X em 9 partes de água ultrapura.

Tampões de Lavagem: Adicionar etanol absoluto antes do uso:

4. Armazenamento e Transporte

• Temperatura ambiente (10-30°C).
• Estáveis até a data de validade na embalagem.
• Para precipitados nos tampões, aquecer a 55-65°C até dissolução completa.

Validade: 12 meses.

5. Segurança

• Uso exclusivo por profissionais treinados.
• Equipamentos de proteção individual são obrigatórios.
• Ambiente de laboratório controlado.
• Não usar componentes danificados ou vencidos.
• Trabalhar em fluxo laminar para evitar contaminações cruzadas.

6. Procedimento Geral

1. Preparo da Amostra:
   • Sangue total: 200 µL + 1,8 mL de Hemalise 1X.
   • Urina: Centrifugar 2 mL e usar o pellet.
2. Extração e Purificação:
   • Adicionar tampão de lise, Proteinase K e carreador.
   • Incubar, centrifugar, e aplicar nas colunas de sílica conforme protocolo detalhado.

O post [Kit para extração e purificação de RNA com colunas de sílica] – 250 extrações – RUO [13-BR850-25] apareceu primeiro em Labtrade do Brasil.

Código: 14-0002-01: 100 mL
Armazenamento: 10-30°C

Resumo:

O RNA Keeper é um reagente para conservação de tecidos que estabiliza e protege o RNA celular de amostras frescas. Compatível com a maioria dos métodos de extração de RNA, elimina a necessidade de processar os tecidos imediatamente ou congelá-los em gelo seco. O RNA Keeper é eficiente em diversos tecidos de vertebrados e até em bactérias como a E.coli. Armazenado em temperatura ambiente, preserva o RNA nos tecidos por até um mês em 4°C e pode ser armazenado a longo prazo em -20°C ou -80°C. Não deve ser usado para o armazenamento de sangue total, plasma ou soro, nem para fins medicinais ou domésticos.

Descrição do Produto:

O RNA Keeper é um reagente aquoso para conservação de tecidos, é atóxico e penetra rapidamente nos tecidos para estabilizar e proteger, in situ, o RNA celular das amostras frescas. As amostras dos tecidos para conservação devem ser colocadas no RNA Keeper imediatamente após a sua obtenção, isto irá garantir a qualidade do RNA a ser purificado.

O RNA Keeper elimina a necessidade de processar os tecidos imediatamente, ou seu congelamento em gelo seco para posterior processamento.

O RNA Keeper preserva o RNA nos tecidos por até 1 dia em 37°C, 1 semana em 25°C e até um mês em 4°C. Os tecidos podem ainda ser armazenados em -20°C por longo período de tempo.

O RNA Keeper vem sendo testado; com sucesso, em diversos tecidos de espécies de vertebrados, a saber, cérebro, coração, rins, baço, fígado, testículos, músculo esquelético, gordura, pulmões e timus. RNA Keeper é também eficiente para E. coli, Drosophila, cultivo celular de tecidos, células sanguíneas da série brancas e alguns vegetais. O RNA Keeper é compatível com a maioria de métodos de extração de RNA, incluindo o Brazol e diversos kits de extração de RNA, comercialmente disponíveis.

Precauções e cuidados:
Este produto é para uso exclusivo em pesquisa, não é indicado como medicamento, nem pode servir para uso doméstico.

Armazenamento e estabilidade:
Armazenar o RNA Keeper em temperatura ambiente. Em caso de precipitação é possível aquecer a solução em 37°C, agitando para redissolver e deixar a solução translúcida.

Utilização:
Utilizar o RNA Keeper somente com tecidos frescos. Não congelar os tecidos antes de fazer a imersão no RNA Keeper.

1. Preparação das amostras de tecidos.

1. Tecido animal

Amostras de tecidos devem ser picotadas nas dimensões aproximadas de 0,5 cm (p.e. 0,5 cm x 1 x 1 cm). Estas amostras devem ser colocadas em 5 volumes de RNA Keeper e armazenar como indicado na seção B, a seguir. O reagente não dissolve ou rompe os tecidos nele submersos. Órgãos pequenos, como p.e. fígado de rato, rins, e baço podem ser armazenados completamente no RNA Keeper.

2. Tecido vegetal

Os tecidos vegetais podem ser diretamente submersos em 5 volumes de RNA Keeper para sua conservação. Tecidos mais resistentes devem ser previamente submetidos a métodos mecânicos ‘ para ruptura.

3. Cultivos celulares

Preparar um “pellet” com as células em cultivo, de acordo com procedimentos padrão pré-estabelecidos. Lavar as células com solução de PBS ou equivalente para retirar algum resíduo de meio de cultivo. Ressuspender as células em volume pequeno de PBS para levemente re-hidratar as células e adicionar então 5-10 volumes de RNA Keeper para as células em suspensão. Muitas vezes não é necessário enxaguar repetidas vezes as células.

4. Células sanguíneas brancas

As células sanguíneas brancas podem ser recuperadas através de protocolos de separação utilizando diversos reagentes, entre os quais o SepCell (Nova Biotecnologia) e proceder no armazenamento como nos cultivos celulares. O RNA Keeper não é recomendado para a conservação do sangue total, plasma ou soro, pois, por causa do elevado conteúdo protéico estes fluidos poder formar um precipitado insolúvel se misturados com o RNA Keeper.

5. Bactérias

O RNA Keeper es um poderoso bacteriostático, isto significa que as bactérias não crescem nesta solução, porém se mantém intactas. As células de E.coli armazenadas em RNA Keeper por um mês entre 2-8°C ficam intactas e mantém seu RNA preservado.

2. Armazenamento das amostras em RNA Keeper

1. Armazenamento em -80°C (recomendado para armazenamento por longo período de tempo).

Incubar as amostras entre 2-8°C durante a noite, no outro dia remover o tecido da solução, antes de armazenar a -80°c, para prevenir a formação de cristais de sal. Para células de cultivo de tecidos, não remover o RNA Keeper, simplesmente congelar a solução completa.

2. Armazenamento das amostras em -20°C (outra opção para armazenamento durante longo período de tempo)

Incubar as amostras entre 2-8°C durante a noite, logo no outro dia, transferir para -20°C. Embora alguns cristais se formem no tampão de armazenamento, isto não afetará o isolamento do RNA que será posteriormente realizado. Se os cristais são um problema, recomenda-se remover o RNA Keeper antes de armazenar as amostras em -20°C. as amostras podem ser subsequentemente congeladas e descongeladas sem afetar a qualidade do RNA a ser extraído.

3. Armazenamento entre 2-8°C

As amostras podem ser armazenadas entre 2-8°C por até um mês sem evidência experimental de degradação do RNA.

4. Armazenamento em temperatura ambiente (25°C).

O RNA isolado de amostras armazenadas em 25°C por uma semana fica intacto, já o RNA armazenado por duas semanas em 25°C aparece levemente degradado, assim para alguns ensaios se torna inviável. É possível manter em gelo as amostras em RNA Keeper por umas quantas horas antes de armazenar em temperatura ambiente.

5. Armazenamento em 37°C

O RNA isolado de amostras armazenadas em 37°C aparece intacto por até 24 horas após a incubação, mas parcialmente degradada após o terceiro dia de incubação.

3. Isolamento de RNA em tecidos conservados em RNA Keeper

1. Os tecidos armazenados no RNA Keeper devem ser removidos da solução com pinças estéreis e submersos na solução de lise correspondente. A homogeneização dos tecidos deve ser rápida.
2. As células armazenadas em RNA Keeper podem ser removidas por centrifugação retirando o sobrenadante; ou diretamente submetidas ao processo de extração considerando uma solução de células/RNA Keeper.
3. Centrifugação: como o RNA Keeper tem densidade maior em comparação com os meios de cultivo de células, se recomenda conhecer a velocidade de centrifugação para cada tipo celular, para HeLa p.e. se recomenda 3.000 g.
4. Para extração com reagente a base de fenol (Brazol p.e.) se recomenda adicionar 10 volumes do reagente para extração e prosseguir como indicado no protocolo.

O post RNA Keeper – 14-0002-01 apareceu primeiro em Labtrade do Brasil.

KIT PARA EXTRACAO E PURIFICACAO DE DNA

COM COLUNAS DE SILICA

O post Kit de Extração e Purificação de DNA com Colunas de Sílica – 13-BR300 apareceu primeiro em Labtrade do Brasil.

Isotiocianato de Guanidina (Guanidine Thiocyanate) Código: 13-1305-05

Apresentação:

• Peso: 500 g
• Fórmula Molecular: C2H6N4S; CH5N3.HSCN
• Peso Molecular: 118.16

Descrição do Produto: O Isotiocianato de Guanidina é um agente caotrópico amplamente utilizado em biotecnologia e biologia molecular. Sua principal função é desnaturar proteínas, facilitando a purificação e extração de mRNA, ácidos nucleicos e proteínas de células. Este composto também atua como um potente inibidor de RNAse, garantindo a proteção dos transcritos contra a degradação durante os processos de extração de tecidos.

Especificações Técnicas:

• Pureza: ≥ 99%
• Aparência: Pó branco, cristalino
• Absorbância (280 nm): ≤ 0.8
• Ponto de Fusão: 120 ± 2.5ºC
• Atividade de RNase: Nenhuma detectada
• Atividade de DNase: Nenhuma detectada
• Resíduos de Ferro: ≤ 0.0002%
• Arsênico: ≤ 0.0001%
• Chumbo: ≤ 0.0002%

Características:

• Agente Caotrópico: Essencial para a preparação de soluções de Isotiocianato de Guanidina.
• Desnaturante de Proteínas: Ideal para a purificação e extração de mRNA, ácidos nucleicos e proteínas.
• Inibidor de RNAse: Protege contra a degradação de transcritos durante a extração de tecidos.

Aplicações: O Isotiocianato de Guanidina é altamente recomendado para o isolamento de DNA e RNA, especialmente a partir de tecidos com elevada atividade de ribonuclease, como o pâncreas. Sua eficácia em desnaturar proteínas e inibir RNAse o torna um componente vital em procedimentos de extração e purificação de ácidos nucleicos.

Importante: Este produto é destinado exclusivamente para uso em pesquisa científica. Não é recomendado para uso humano ou terapêutico.

Referências:

• Chirgwin, J.M., Przybyla, A.E., MacDonald, R.J., and Rutter, W.J. (1979). Biochemistry, 18:5294-5299.

Aviso: ESTE PRODUTO É ESTRITAMENTE PARA PESQUISA CIENTÍFICA, NÃO SENDO RECOMENDADO PARA USO EM DIAGNÓSTICO CLÍNICO OU TERAPÊUTICO.

Aqui estão mais utilidades do Isotiocianato de Guanidina com uma descrição detalhada:

1. Extração de mRNA: O Isotiocianato de Guanidina facilita a purificação e extração de mRNA de células e tecidos, garantindo a integridade dos transcritos para estudos de expressão gênica.
2. Isolamento de DNA: Utilizado na separação de DNA de diversas fontes biológicas, o Isotiocianato de Guanidina ajuda a obter DNA de alta qualidade para análises subsequentes.
3. Desnaturação de Proteínas: Quebra a estrutura tridimensional das proteínas, tornando-as solúveis e prontas para análise em várias técnicas bioquímicas.
4. Proteção Contra RNAse: Atua como um potente inibidor de RNAse, protegendo os ácidos nucleicos durante a extração, essencial para evitar a degradação do RNA.
5. Purificação de Ácidos Nucleicos: Facilita a purificação de DNA e RNA, removendo contaminantes e garantindo a pureza dos ácidos nucleicos para uso em experimentos sensíveis.
6. Preparação de Soluções: Serve como componente principal em soluções de isotiocianato de guanidina utilizadas em protocolos laboratoriais, proporcionando um ambiente adequado para a desnaturação de biomoléculas.
7. Estudo de Proteínas: Auxilia em estudos sobre a estrutura e função de proteínas desnaturadas, sendo crucial para pesquisas que investigam o dobramento e a estabilidade proteica.
8. Aplicações em Biotecnologia: Essencial em diversas técnicas de biotecnologia, incluindo PCR, RT-PCR e clonagem molecular, onde a pureza e integridade dos ácidos nucleicos são fundamentais.
9. Análise de Expressão Gênica: Facilita a extração de RNA para análises de expressão gênica, permitindo a quantificação precisa de níveis de mRNA em diferentes condições experimentais.
10. Pesquisa Biomédica: Amplamente utilizado em pesquisas biomédicas para estudar mecanismos moleculares e celulares, o Isotiocianato de Guanidina é vital para a investigação de doenças e desenvolvimento de terapias.
11. Prevenção de Contaminação Enzimática: Previne a contaminação enzimática em amostras biológicas, garantindo resultados mais confiáveis e reproduzíveis em experimentos de biologia molecular.
12. Uso em Diagnósticos de Pesquisa: Embora não recomendado para uso clínico, é utilizado em testes de pesquisa para desenvolver métodos diagnósticos experimentais.
13. Desnaturalização para Estudos de Hibridização: Utilizado em técnicas de hibridização de ácidos nucleicos, onde a desnaturação de DNA ou RNA é necessária para o pareamento de sondas específicas.
14. Proteção em Armazenamento de Ácidos Nucleicos: A sua capacidade de inibir RNAse também o torna útil na proteção de ácidos nucleicos durante o armazenamento a longo prazo.
15. Facilitação de Transcrição Reversa: Melhora a eficiência da transcrição reversa ao desnaturar o RNA, facilitando a síntese de cDNA de alta qualidade.
16. Compatibilidade com Kits de Extração: Utilizado em conjunto com kits de extração de ácidos nucleicos comerciais, proporcionando um método padronizado e eficiente para o isolamento de material genético.
17. Desnaturação em Preparações de Amostras: Utilizado na preparação de amostras para várias técnicas de eletroforese, ajudando na análise de proteínas e ácidos nucleicos.
18. Utilidade em Estudos de Genômica: Importante em estudos de genômica, onde a extração e purificação de DNA e RNA de alta qualidade são cruciais para a sequenciação e análise de genomas.

Essas utilidades demonstram a versatilidade e importância do Isotiocianato de Guanidina em diversos campos da biologia molecular e pesquisa biomédica.

O post Isotiocianato de guanidina – 500g | 13-1305-05 apareceu primeiro em Labtrade do Brasil.

Kit para extração de DNA genômico

Código: 13-BR200 – Kit para 50 amostras

Instruções de Uso

Descrição:

Metodologia simples e rápida de extração e purificação de DNA a partir de amostras biológicas (sangue total, soro, plasma, bactérias e tecidos vegetais).

A metodologia utiliza o Isocianato de Guanidina e ligação covalente do DNA em partículas de sílica.

Componentes:

– Tubos com tampão de lise e resina brasílica (L1),

1 Frasco contendo 95 mL do tampão de lavagem (L2),

1 Frasco contendo 95 mL do tampão de lavagem(L3),

1 Frasco contendo 95 mL do tampão de lavagem (L4),

4 Tubos contendo o tampão de eluição (E1).

Protocolo Básico:

1. Homogeneizar o tubo contendo o tampão L1 (vórtex por 10 s);
2. Adicionar 100 L de amostra no tubo com o tampão L1 (vórtex por 10 s);
3. Deixar o tubo em temperatura ambiente por 10 min agitando periodicamente a cada minuto;
4. Agitar novamente no vórtex durante 10 s;
5. Centrifugar a 10.000 g durante 30 s;
6. Descartar o sobrenadante (preferencialmente por sucção, sem remover o precipitado);
7. Lavar o precipitado adicionado 900 L do tampão L2, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens, e centrifugar a 10.000 g durante 30 s;
8. Descartar o sobrenadante, sem remover o precipitado;
9. Lavar novamente o precipitado adicionando 900 L do tampão L2, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens e centrifugar a 10.000 g durante 30 s;
10. Descartar o sobrenadante, sem remover o precipitado;
11. Lavar o precipitado adicionando 900 L do tampão L3, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens e centrifugar a 10.000 g durante 30 s;
12. Descartar o sobrenadante, sem remover o precipitado;
13. Lavar novamente o precipitado adicionando 900 L do tampão L3, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens e centrifugar a 10.000 g durante 30 s;
14. Lavar o precipitado adicionando 900 L do tampão L4, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens e centrifugar a 10.000 g durante 30 s;
15. Descartar o sobrenadante, sem remover o precipitado;
16. Lavar novamente o precipitado adicionando 900 L do tampão L4, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens e centrifugar a 10.000 g durante 30 s;
17. Deixar secar o pellet a 56°C por 10 min com a tampa do tubo aberta (estufa ou termobloco),
18. Adicionar 100 L do tampão de eluição (E1) ao precipitado;
19. Com leves movimentos descolar o precipitado do fundo do tubo e deixar por mais 10 min a 56°C, desta vez com a tampa do tubo fechada;
20. Centrifugar por 10 min a 12.000 g;
21. Retirar o sobrenadante e transferir para novo tubo, pois aqui estarão os ácidos nucléicos
    extraídos;
22. Utilizar o material obtido em procedimentos de biologia molecular, como amplificação por PCR;
23. Verificar a presença dos ácidos nucléicos através de eletroforese em géis de agarose corados com brometo de etídeo ou blue Green loading dye, analisando sob luz ultravioleta ou quantificar em espectrofotômetro;
24. Para eliminar algum resto de resina nesta etapa, centrifugar novamente a 12.000 g durante
    30s.

Armazenamento:

Temperatura ambiente.

Garantia da Qualidade

Garantia do produto Brasílica por ela fornecida contra defeitos de produção pelo período de validade do produto, salvo especificações em contrário a constar da proposta.

A garantia abrange defeitos de produção.

Exceções na garantia:

Todos os produtos com defeitos oriundos de mau uso, imperícia, conservação ou armazenagem inadequada.

Quando não for utilizado de acordo com sua finalidade de aplicação.

O post Brasílica – Kit para a extração de DNA baseado em resina 50 amostras – SKU 13-BR200 apareceu primeiro em Labtrade do Brasil.

BRAZOL

Catálogo N°: 13-BR188
Apresentação: 100 mL
Armazenamento: 2ºC a 8ºC

Estabilidade: Estável por um ano, desde que armazenado entre 4° e 8°C. Pode ser transportado em temperatura ambiente, e no recebimento, imediatamente armazenado em geladeira.

Descrição:

O BRAZOL é um reagente utilizado no isolamento de RNA a partir de amostras de células e tecidos. O BRAZOL é a versão otimizada do popular método passo-único de isolamento total de RNA, baseado na metodologia desenvolvida por Chomczynski & Sachi (1, 2, 3).
Esta metodologia de extração tem se mostrado altamente eficaz na purificação de ácidos nucléicos a partir de materiais biológicos, tais como: soro, plasma, sangue total coletado ou não com EDTA, células obtidas a partir de cultivos e/ou tecidos congelados. O protocolo a seguir foi padronizado para aplicação em protocolos de amplificação e outras técnicas comuns em laboratórios de Biologia Molecular. Esta técnica é confiável e possui bom desempenho para diferentes quantidades de amostras.

O BRAZOL combina as propriedades do fenol e do isotiocianato de guanidina, que inibem imediata e efetivamente a atividade da enzima RNAse. As células presentes na amostra biológica são lisadas através deste reagente e, após homogeneização e adição de clorofórmio e posterior centrifugação, o produto resultante é separado em duas fases visíveis: aquosa e orgânica, respectivamente.

O RNA permanece exclusivamente na fase aquosa, o DNA pode ser encontrado na interfase entre a fase orgânica e a fase aquosa e as proteínas exclusivamente na fase orgânica (azul). O RNA pode ser precipitado através da adição de isopropanol gelado seguido de lavagens com etanol 70% e dissolvido em água ou tampão TE. O DNA e as proteínas podem ser precipitados através da adição de etanol e isopropanol, seguido de lavagem com etanol.

Precauções especiais de manuseio: O BRAZOL contém fenol (tóxico) e isotiocianato de guanidina (cáustico) que podem provocar queimaduras e, se ingerido, pode ser fatal. Ao empregá-lo em rotinas laboratoriais utilize sempre luvas, avental e protetor para os olhos. Evite o contato com a pele ou com a roupa e não inale seu vapor.
Leia as notas de advertência contidas no frasco que acondiciona o produto.

O post Brazol, reagente para extração de ácidos nucléicos e proteínas apareceu primeiro em Labtrade do Brasil.

O post CTAB – Brometo de cetiltirmetilamônio SKU: 13-11807-05 apareceu primeiro em Labtrade do Brasil.

Aplicações:
Indicado para extração de ácidos nucleicos (RNA) a partir de amostras como sangue, urina, saliva, cultivos bacterianos, tecidos e células infectadas por vírus.

Descrição:
Kit completo para extração manual com beads magnéticas, especialmente formulado para amostras vegetais e biológicas. Contém soluções com alta capacidade de lise e colunas com membrana de sílica que permitem a obtenção de RNA de alta pureza, ideal para aplicações em biologia molecular. A Proteinase K fornecida facilita a digestão de proteínas e remoção de contaminantes.

Características:

• Método: Colunas com membrana de sílica (spin columns)

• Tipo de amostra: sangue, urina, vírus, saliva, tecidos, cultivos bacterianos

• Rendimento: 4–6 µg de RNA por extração

• Pureza (A260/280): 1,6 – 1,9

• Concentração: 40–100 ng/µL

• Volume de eluição: 200 µL

• Tempo total de extração: ~30 minutos

• Alta reprodutibilidade intra e interensaios

• Livre de reagentes tóxicos ou perigosos

• Excelente desempenho em amostras complexas

O post Kit extração magnética manual de DNA vegetal (beads) – 50 extrações – RUO apareceu primeiro em Labtrade do Brasil.