RNA Keeper – 14-0002-01

RNA KEEPER

Código: 14-0002-01: 100 mL
Armazenamento: 10-30°C

Resumo:

O RNA Keeper é um reagente para conservação de tecidos que estabiliza e protege o RNA celular de amostras frescas. Compatível com a maioria dos métodos de extração de RNA, elimina a necessidade de processar os tecidos imediatamente ou congelá-los em gelo seco. O RNA Keeper é eficiente em diversos tecidos de vertebrados e até em bactérias como a E.coli. Armazenado em temperatura ambiente, preserva o RNA nos tecidos por até um mês em 4°C e pode ser armazenado a longo prazo em -20°C ou -80°C. Não deve ser usado para o armazenamento de sangue total, plasma ou soro, nem para fins medicinais ou domésticos.

 

Descrição do Produto:

O RNA Keeper é um reagente aquoso para conservação de tecidos, é atóxico e penetra rapidamente nos tecidos para estabilizar e proteger, in situ, o RNA celular das amostras frescas. As amostras dos tecidos para conservação devem ser colocadas no RNA Keeper imediatamente após a sua obtenção, isto irá garantir a qualidade do RNA a ser purificado.

O RNA Keeper elimina a necessidade de processar os tecidos imediatamente, ou seu congelamento em gelo seco para posterior processamento.

O RNA Keeper preserva o RNA nos tecidos por até 1 dia em 37°C, 1 semana em 25°C e até um mês em 4°C. Os tecidos podem ainda ser armazenados em -20°C por longo período de tempo.

O RNA Keeper vem sendo testado; com sucesso, em diversos tecidos de espécies de vertebrados, a saber, cérebro, coração, rins, baço, fígado, testículos, músculo esquelético, gordura, pulmões e timus. RNA Keeper é também eficiente para E. coli, Drosophila, cultivo celular de tecidos, células sanguíneas da série brancas e alguns vegetais. O RNA Keeper é compatível com a maioria de métodos de extração de RNA, incluindo o Brazol e diversos kits de extração de RNA, comercialmente disponíveis.

Precauções e cuidados:
Este produto é para uso exclusivo em pesquisa, não é indicado como medicamento, nem pode servir para uso doméstico.

Armazenamento e estabilidade:
Armazenar o RNA Keeper em temperatura ambiente. Em caso de precipitação é possível aquecer a solução em 37°C, agitando para redissolver e deixar a solução translúcida.

Utilização:
Utilizar o RNA Keeper somente com tecidos frescos. Não congelar os tecidos antes de fazer a imersão no RNA Keeper.

1. Preparação das amostras de tecidos.

1. Tecido animal

Amostras de tecidos devem ser picotadas nas dimensões aproximadas de 0,5 cm (p.e. 0,5 cm x 1 x 1 cm). Estas amostras devem ser colocadas em 5 volumes de RNA Keeper e armazenar como indicado na seção B, a seguir. O reagente não dissolve ou rompe os tecidos nele submersos. Órgãos pequenos, como p.e. fígado de rato, rins, e baço podem ser armazenados completamente no RNA Keeper.

2. Tecido vegetal

Os tecidos vegetais podem ser diretamente submersos em 5 volumes de RNA Keeper para sua conservação. Tecidos mais resistentes devem ser previamente submetidos a métodos mecânicos ‘ para ruptura.

3. Cultivos celulares

Preparar um “pellet” com as células em cultivo, de acordo com procedimentos padrão pré-estabelecidos. Lavar as células com solução de PBS ou equivalente para retirar algum resíduo de meio de cultivo. Ressuspender as células em volume pequeno de PBS para levemente re-hidratar as células e adicionar então 5-10 volumes de RNA Keeper para as células em suspensão. Muitas vezes não é necessário enxaguar repetidas vezes as células.

4. Células sanguíneas brancas

As células sanguíneas brancas podem ser recuperadas através de protocolos de separação utilizando diversos reagentes, entre os quais o SepCell (Nova Biotecnologia) e proceder no armazenamento como nos cultivos celulares. O RNA Keeper não é recomendado para a conservação do sangue total, plasma ou soro, pois, por causa do elevado conteúdo protéico estes fluidos poder formar um precipitado insolúvel se misturados com o RNA Keeper.

5. Bactérias

O RNA Keeper es um poderoso bacteriostático, isto significa que as bactérias não crescem nesta solução, porém se mantém intactas. As células de E.coli armazenadas em RNA Keeper por um mês entre 2-8°C ficam intactas e mantém seu RNA preservado.

2. Armazenamento das amostras em RNA Keeper

1. Armazenamento em -80°C (recomendado para armazenamento por longo período de tempo).

Incubar as amostras entre 2-8°C durante a noite, no outro dia remover o tecido da solução, antes de armazenar a -80°c, para prevenir a formação de cristais de sal. Para células de cultivo de tecidos, não remover o RNA Keeper, simplesmente congelar a solução completa.

2. Armazenamento das amostras em -20°C (outra opção para armazenamento durante longo período de tempo)

Incubar as amostras entre 2-8°C durante a noite, logo no outro dia, transferir para -20°C. Embora alguns cristais se formem no tampão de armazenamento, isto não afetará o isolamento do RNA que será posteriormente realizado. Se os cristais são um problema, recomenda-se remover o RNA Keeper antes de armazenar as amostras em -20°C. as amostras podem ser subsequentemente congeladas e descongeladas sem afetar a qualidade do RNA a ser extraído.

3. Armazenamento entre 2-8°C

As amostras podem ser armazenadas entre 2-8°C por até um mês sem evidência experimental de degradação do RNA.

4. Armazenamento em temperatura ambiente (25°C).

O RNA isolado de amostras armazenadas em 25°C por uma semana fica intacto, já o RNA armazenado por duas semanas em 25°C aparece levemente degradado, assim para alguns ensaios se torna inviável. É possível manter em gelo as amostras em RNA Keeper por umas quantas horas antes de armazenar em temperatura ambiente.

5. Armazenamento em 37°C

O RNA isolado de amostras armazenadas em 37°C aparece intacto por até 24 horas após a incubação, mas parcialmente degradada após o terceiro dia de incubação.

3. Isolamento de RNA em tecidos conservados em RNA Keeper

1. Os tecidos armazenados no RNA Keeper devem ser removidos da solução com pinças estéreis e submersos na solução de lise correspondente. A homogeneização dos tecidos deve ser rápida.
2. As células armazenadas em RNA Keeper podem ser removidas por centrifugação retirando o sobrenadante; ou diretamente submetidas ao processo de extração considerando uma solução de células/RNA Keeper.
3. Centrifugação: como o RNA Keeper tem densidade maior em comparação com os meios de cultivo de células, se recomenda conhecer a velocidade de centrifugação para cada tipo celular, para HeLa p.e. se recomenda 3.000 g.
4. Para extração com reagente a base de fenol (Brazol p.e.) se recomenda adicionar 10 volumes do reagente para extração e prosseguir como indicado no protocolo.