PROGRAMA DE APOIO À PESQUISA EM GENÉTICA MOLECULAR

MODALIDADE: SEQUENCIAMENTO DE DNA

Tipos de Amostras:
- a. Plasmídeos
- b. Produtos de PCR
- c. Sequenciamento com qualidade para publicação (sequenciamento das duas fitas com múltiplas sobreposições).
Qualidade das Sequências:
- a. O sequenciamento é realizado em sequenciador capilar, reduzindo significativamente problemas de identificação de amostras.
- b. As sequências obtidas têm em média 500 bases ou mais, com acurácia de 95%.
Resultados:
- a. Os resultados serão enviados por correio eletrônico ou Sedex (cd, zip ou disquete).
- b. Os resultados são apresentados em formato de arquivo de texto e eletroferograma. Recomenda-se o uso de programas como Chromas para PC ou Edit View para Mac na visualização do eletroferograma.
- c. O pesquisador deve verificar e editar os resultados cuidadosamente, pois o programa de determinação das bases pode cometer erros.
Recomendação para o Envio das Amostras:
- a. Plasmídeos:
  - i. A melhor opção é o envio de colônias em meio sólido, isoladas em placas de 96 poços. Recomenda-se o uso das linhagens de bactéria dh5α e dh10b. Não recomendamos jm101.
  - ii. Caso a preferência seja pelo envio de DNA, enviar pelo menos 800 ng de DNA na concentração de 200 ng/μL. Recomendamos que o DNA seja purificado com o kit da Labtrade (NucleoSpin Extract). Não ressuspender o DNA em TE. Use água miliQ ou equivalente.
- b. Produtos de PCR:
  - i. O produto de PCR deve ser específico, e recomendamos a purificação do DNA com o kit da Labtrade (NucleoSpin Extract). Não ressuspender o DNA em TE. Use água miliQ ou equivalente. Enviar 200 ng de DNA na concentração de 20 ng/μL.

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